基于episomal CRISPR/Cas9 载体的基因敲入方法
【目的】研究一种在哺乳动物细胞中高效的基因敲入方法，比较带有oriP-EBNA1 序列的episomal CRISPR/Cas9载体与普通CRISPR/Cas9载体的基因敲入效率是否有差别。【方法】首先利用慢病毒载体构建稳定表达红色荧光蛋白DsRedE2的人胚肾细胞系（293FT）与人诱导多能干细胞系（hiPS）；利用CRISPR/Cas9序列设计网站，设计和合成靶向DsRedE2的向导RNA（sgRNA），分别克隆至带有oriP-EBNA1的episomal CRISPR/Cas9敲除载体与普通CRISPR/Cas9敲除载体中，测序筛选插入正确片段的克隆；然后设计靶向DsRedE2的同源臂，...
Saved in:
| Main Authors: | , , |
|---|---|
| Format: | Article |
| Language: | zho |
| Published: |
Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University
2018-01-01
|
| Series: | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
| Subjects: | |
| Online Access: | http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/43567699/ |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|