小鼠Neuronatin基因真核表达载体构建及其蛋白产物的检测 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
【目的】 构建基因Nnat的真核表达载体pEGFP*9鄄N1/Nnat并在真核细胞中表达目的蛋白65377; 【方法】 RT*9鄄PCR法扩增Nnat基因编码区(ORF),利用基因克隆技术构建真核表达载体,酶切及测序进行鉴定;载体构建成功后转染HepG2细胞,观察融合蛋白在细胞中的定位,Western blot检测其在真核细胞中的表达65377;【结果】 RT*9鄄PCR法扩增出Nnat基因的两种亚型,相应的双酶切能够获得插入的目的基因片断,测序分析未发现突变;荧光显微镜观察到两种融合蛋白在细胞中分布与EGFP明显不同,融合蛋白主要分布在细胞质中,细胞核中没有表达;Western blot结果可见两条明显的特异条带65377;【结论】 小鼠Nnat基因真核表达载体构建成功,并能在真核细胞中表达出目的蛋白65377;