恶性疟原虫红内期p41-3 基因真核表达重组质粒的构建及序列分析 - 单志新; 余新炳; 李学荣; 马长玲; 陆家海; 徐 劲 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
【目的】构建恶性疟原虫海南(FCC1/ HN)株p41-3 基因真核表达重组质粒pcDNA3-p41-3 ;测定p41-3 基因序列, 并了解FCC1/HN 株与其它分离株p41-3 序列的差异。【方法】根据p41-3 基因已知序列设计合成2 对引物, 用PCR 技术从 FCC1/ HN 株基因组DNA 中扩增p41-3 基因;将p41-3 基因定向克隆入真核表达载体pcDNA3 , 转化大肠杆菌DH5α感受态细 胞;用酶切, PCR 扩增鉴定筛选到的重组质粒阳性克隆。以正确的重组质粒为模板, 用双脱氧链末端终止法测定p41-3 基因序 列, 应用软件辅助分析p41-3 序列及进行同源性比较。【结果】PCR 扩增得到特异的FCC1/HN 株p41-3 基因;正确的pcDNA3 -p41-3 重组质粒被筛选和鉴定。测序表明, FCC1/HN 株p41-3 基因大小为2 137 bp , 编码375 个氨基酸。恶性疟原虫 FCC1/ HN 株与FCBR 株p41-3 基因核苷酸序列同性为98 .98 %, 编码氨基酸序列同源性为99.73%。【结论】从恶性疟原虫 FCC1/ HN 株基因组DNA 中获取p41-3 基因, 成功构建真核表达重组质粒pcDNA3-p41-3, 并测定了FCC1/ HN 株p41-3 基因的序列;FCC1/HN 株与其它分离株p41-3 基因有高度的同源性。