Maroteaux-Lamy综合征的ARSB基因分析及新突变的致病性鉴定 - 郭东炜; 潘伟绵; 杜敏联; 郭奕斌 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
【目的】对7家拟诊为Maroteaux_Lamy综合征（MPSⅥ）的患儿及其父母进行ARSB基因的突变检测 和新突变的致病性鉴定，以揭示其分子发病机制，为将来的产前/植入前基因诊断等创造前提条件。【方法】在 临床初诊及GAG尿检和MPS酶检的基础上，抽取患儿及其父母EDTA抗凝血，进行ARSB基因的PCR扩增和 Sanger测序。对所发现的新突变，在经HGMD、1000G和ExAC等数据库核实排查后，首先用SWISS-MODEL软件 分析、比对突变蛋白和正常蛋白的空间构象，然后用ClustalX软件分析跨物种氨基酸的保守性，用PROVEAN、 SIFT、PolyPhen-2软件预测新突变的致病性，最后用ACMG标准对新突变的致病性进行综合分析鉴定。【结果】 1） 7个家系先证者的基因检测结果分别为：No1： c.574T>C，p.C192R纯合错义突变；No2： c.160G>A/p.D54N（来 自其母）和c.1197C>G/p.F399L（来自其父）的复合杂合子；No3：仅检出c.1072G>A/p.V358M和IVS5as（-27）A> C变异，但酶检和临床表型符合VI型；No4：为c.281C>T，p.S94L（新突变，来自其母）和IVS5as（-27）A>C（来自 其父）的复合杂合子；No5：为c.1197C>G，p.F399L纯合错义突变；No6：为c.1197C>G，p.F399L（来自其母）和 c.1379C>T，p.S460F（新突变，来自其父）的复合杂合子；No7：为c.499G>A，p.G167R（来自其父）和c.1325C> T，p.T442M（来自其母）的复合杂合子。2）新突变鉴定结果：对正常ARSB酶蛋白和p.S94L突变酶蛋白的空间构 象的预测比对结果显示，两者有明显区别；跨物种保守性分析结果显示， p.94突变点所在氨基酸（S）在物种进化 过程中具有高度保守性；PROVEAN、SIFT和PolyPhen-2软件对p.S94L预测结果分别为：Deleterious、Damaging和 Probablydamaging。用上述方法对p.S460F的预测结果及ACMG的综合分析结果也显示该突变可能是致病性 的。【结论】1）家系4的p.S94L和家系6的p.S460F新突变可能都是新的致病性突变，有可能都是引起患儿发病 的内在原因之一。2）家系1， 2， 5， 6， 7可以确诊为MPSVI型，其基因型和表现型具有显著的相关性，家系3虽经 酶检确诊，临床症状和尿检结果也都与MPSVI型符合，但却未能在DNA水平查到明确的突变类型，其表现型与 基因型的相关性还有待进一步证实。